人妻有码中文字幕-国产视频一区二区-99热在线观看-在厨房拨开内裤进入毛片

技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > western blot 常見問題及解決辦法

western blot 常見問題及解決辦法

更新時間:2019-10-29   點擊次數:2451次

     我們在做WB時zui常遇到的問題也是驚人的相似——樣品漂浮、蛋白條帶扭曲(無法準確判斷蛋白分子量)、轉膜后看不到帶藍色或橙色的指示條帶、抗體孵育不均勻導致曝光度差異很大(依然是會影響到蛋白表達量的估算)。

     這些問題其實都或多或少與樣品前處理有關。也就是說,我們*可以通過優化樣品處理手法,以及經驗累積,來獲得的WB結果。

     1.出現樣品漂浮怎么辦??

     原因分析:樣品中含有未除凈的溶劑或雜質,其密度比電泳緩沖液小

     解決辦法:處理組織或菌體時,需充分分散或裂解,確保目的蛋白盡可能的釋放;
     熱處理粗樣時,確保升溫迅速,并且金屬浴或水溫的實際溫度達到100℃(在海拔較高處水的沸騰不能確保溫度);
     離心的轉速和時間足夠;
     吸取上清液時盡量不要碰到中間層

     2.蛋白條帶出現扭曲怎么辦?

     原因分析:分離膠的濃度與蛋白分子量不對應;灌膠時間過長或過短,導致丙烯酰胺的交聯度不均勻

     解決辦法:根據目的蛋白的分子量選擇正確的分離膠濃度;
制備分離膠與濃縮膠時,應保證緩沖液母液的正確稀釋,以及各組分的充分混勻(僅用移液器吹吸是不夠的,可以迅速用磁力攪拌器進行混勻)

     3.轉膜后沒有指示條帶怎么辦?

     原因分析:如果此時SDS-PAGE膠上也沒有指示劑,則表明轉膜時間過長,蛋白穿膜(此時就沒有再繼續做下去的必要了)

     解決辦法:注意控制轉膜時間;
電泳液反復使用也可能導致轉膜失敗

     4.抗體孵育不均勻怎么辦?

     原因分析:孵育時振蕩搖床轉速過快,或是混勻直徑不夠,導致孵育不充分或不均勻

     解決方法:確保搖床可以在50 rpm穩定運行;選擇振蕩直徑在5~10 mm范圍內的搖床




主站蜘蛛池模板: 亚洲中文字幕无码久久综合网| 不卡无码人妻一区三区音频| 中文幕无线码中文字蜜桃| 69风韵老熟女口爆吞精| 久久人人玩人妻潮喷内射人人| 亚洲综合激情另类小说区| 老师穿超短包臀裙办公室爆乳| 亚洲乱色熟女一区二区三区丝袜| 国模晨雨浓密毛大尺度150p| 亚洲欧洲另类春色校园小说| 欧美激情综合亚洲一二区| 成人午夜福利视频| 中文字幕av免费专区| 亚洲成在人线av| 国产成人一区二区三区视频免费 | 国产精品久久久久久久9999| 亚洲一区二区三区在线观看网站| 尤物av无码色av无码| 国产精品午夜小视频观看| 欧美性受xxxx白人性爽| 国产在线 | 中文| 亚洲av成人一区二区三区在线播放| 国产在线精品欧美日韩电影| 国产成人无码免费视频在线| 国产香蕉97碰碰久久人人| 久久久久久午夜成人影院 | 国产女人高潮抽搐喷水视频| 国产三级在线观看免费| 亚洲av无码久久| 夜夜春夜夜爽| 婷婷伊人久久大香线蕉av| 久久久久国产一区二区三区| 两个黑人大战嫩白金发美女 | 69精品人人人人| 免费无码作爱视频 | 成人欧美一区二区三区的电影 | 亚洲丰满熟女一区二区v| 亚洲av无码一区二区三区观看| 任你躁国产自任一区二区三区| 亚洲精品成人久久久| 欧美性猛交xxxx乱大交丰满|